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Caracterización bioquímica de una cloragenato esterasa producida por fermentación en medio sólido sobre resiudos del café
LORENA RAMIREZ VELASCO
JUAN CARLOS MATEOS DIAZ - Asesor de tesis
Acceso Abierto
Atribución-NoComercial-SinDerivadas
"Este trabajo tuvo como propósito principal el purificar y caracterizar parcialmente una clorogenato esterasa producida por fermentación en medio sólido, utilizando como sustratos residuos del café. Apartir de una colección de 20 hongos, aislados de la pulpa de café, se seleccionó la cepa AS III por su capacidad de proudcir una actividad clorogenato esterasa. Dicha actividad fue determinada por un método rápido de búsqueda y selección (screening) propuesto en el presente trabajo, que permite cuantifciar diversas actividades (feruloil esterasa, tanasa y clorogenato esterasa) de forma simultánea. El análisis morfológico y de secuencia de la región ITS1-I5.8.ITS2 permitió identificar el género y especie de la cepa AS III como Aspergillus ochraceus. Con este microorganismos y el método de búsqueda y selección porpuesto se estudió la producción por fermentación en medio sólido (FMS) de clorogenato esterasa usando como inductor la cascarilla y/o pulpa de café con o sin la adición de glucosa. Se logró una productividad 7.5 veces mayor a las previamente reportadas en fermentación sumergida, empleando la cascarilla de café como inductor. Además se demstró la utilidad de nuestro método para mejorar las condiciones de cultivo y dirigir la síntesis de una enzima en particular. Posteriormente se purificó y caracterizó parcialmente la clorogenato esterasa de A. ochraceus obtenida de manera selctiva por FMS. Se logro un factor de purificación de 1084, despues de 3 etapas de purificación empleando una columna hidrofóbica (Fenil sefarosa) una anionica (DEAE-sefarosa) y una de filtración en gel (Superdex G200) Se demotró que la clorogenato esterasa es un monómero con un peso molecular de 72 kDa. La enzima parcialmente purificada tiene una actividad óptima y un pH de 6.5. Los estudios de inhibición demostraron que la enzima contiene una serina caralítica. Finalmente se demostró mediante ensayos de hidrólisis que la clorogenato esterasa de A . ochraceus es nuevo biocataliador capaz de modificar directamente los ácidos fenólicos presentes en los residuos generados durante el beneficio del café, convirtiendole en un verdadero interés biotecnológico"
28-05-2009
Tesis de maestría
CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA
Aparece en las colecciones: MAESTRÍA EN CIENCIA Y TECNOLOGÍA

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