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Establecimiento de las condiciones para la obtención de protoplastos y regeneración de Rhyncholaelia digbyana
LUIS ALBERTO MOTA NARVAEZ
GUADALUPE LOPEZ PUC
Acceso Abierto
Atribución-NoComercial-SinDerivadas
"Se presenta un protocolo para el aislamiento y la regeneración de protoplastos a partir de tejido foliar de Rhynchoalaelia digbyana. Los protoplastos se aislaron usando enzimas hemicelulasa de 1.5, 2.25 y 3% (p/v) pectinasa al 0.5 y 0.75% (p/v) y celulasa al 1 y 2% (p/v) El recuento de protoplastos se llevó a cabo con una cámara Neubauer y un microscopio óptico a 40X y se determinó la viabilidad con el colorante azul de Evans al 0.025% (p/v) Los protoplastos se cultivaron siguiendo el método estándar de placa, utilizando el medio K&M con 0.06 M de sacarosa, 2.3% de Gelrite y reguladores de crecimiento vegetal. El contenido de ADN se determinó por citómetro de flujo BD Accuri C6 (R) equipado con un láser azul y rojo, 2 detectores de dispersión de acul y 4 detectores de fluorescencia con filtros optimizados para la realización del estudio citológico se colectaron a las 8 horas las raíces jóvenes con meristemos apicales de plántulas in vitro de r. digbyana. Se obtuvo un rendimiento de 386250 ± 1875 protoplastos/g de tejido usando la combinación enzimática de 1.5% (p/v) de incubación de 4 horas. Las colonias se observaron después de dos meses de cultivo y se obtuvo el mayor número de colonias. (1.66±0.50) cuando los protoplastos se cultivaron en medio K&M con 4,53 uM de ácido 2,4-diclorofenoxiacetico (2.,4-D), 0.91 uM de zeatina y 3.1 uM de 6-Benzilaminopurina (BA) El contenido de ADN nuclear estimado por citometrá de flujo para R. digbyana fue de 27.39 ±3.8 pg de ADN equivalente a 26.79 x 10 9 pb y el número de cromosomas mitóticos contados fue de 2 n=49”
01-10-2018
Tesis de maestría
CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA
Aparece en las colecciones: MAESTRÍA EN CIENCIAS DE LA FLORICULTURA

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