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Obtención de interferón gamma recombinante de bovino y producción de anticuerpos reactivos
ALEJANDRA COBIAN GARCIA
Angel Hilario Alvarez Herrera
Acceso Abierto
Atribución-NoComercial-SinDerivadas
En los últimos años se ha mostrado un creciente interés, por mejorar la detección de algunas enfermedades que afectan al ganado, entre ellas la tuberculosis bovina, en la que se ha demostrado que el interferón-gamma bovino (BoIFN-γ) se sobre produce en los bovinos infectados por Mycobacterium bovis, como una respuesta inmune provocada por la infección bacteriana intracelular. Por ello, surge el interés de desarrollar reactivos para un método de diagnóstico alternativo que permita detectar o diagnosticar esta y algunas otras enfermedades del ganado y que están basadas en la detección directamente del BoIFN-γ en sangre de los animales infectados. Por tal motivo, este trabajo tuvo como objetivo producir interferón-gamma de bovino, como primer paso para obtener anticuerpos específicos como principal herramienta de detección o diagnóstico que puedan servir para el desarrollo de la prueba in vitro. Por ello, se realizó la producción de la proteína completa de interferón-gamma bovino, que sirvió como antígeno para la producción de anticuerpos policlonales en ratones de la cepa Balb/c, así como la producción de anticuerpos recombinantes scFv, por la técnica de despliegue en fagos (Phage Display). La proteína BoIFN-γ, se produjo a partir de una secuencia genética optimizada para su expresión a partir de E. coli BL21, utilizando el vector de expresión pET28a+ y fue purificada con columnas de afinidad a etiquetas de His6x. Mediante análisis de Western blot y anticuerpos específicos se demostró la obtención de la proteína de forma abundante y soluble en el extracto bacteriano. Los anticuerpos policlonales de ratón contra BoIFN-γ, mostraron un límite máximo de detección a una dilución 1:811,200. A partir de un bazo de gallina no inmune se generó una biblioteca génica de scFv y por la técnica de despliegue en fagos se aislaron 2 clonas de expresión de scFv (denominadas Fvg-1, Fvg-17), las cuales mostraron capacidad de reconocimiento parcial de BoIFN-γ recombinante, sin embargo, quedó pendiente comprobar su afinidad por BoIFN-γ comercial.
27-02-2020
Tesis de maestría
CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA
Versión publicada
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