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DESARROLLO DE UN SISTEMA DE EXPRESIÓN GÉNICA REGULADO POR HIPOXIA EN CÉLULAS DE MAMÍFERO
Jorge Luis Mazorra Carrillo
Hugo Esquivel Solis
Acceso Abierto
Atribución-NoComercial-SinDerivadas
"La hipoxia es una característica de las enfermedades crónicas y en conjunto con la inflama-ción, conducen a la fibrosis y la degeneración tisular mediante la señalización molecular de dos genes maestros: el factor inducible por hipoxia 1α/β y el factor nuclear kappa B. El objeti-vo de este proyecto fue desarrollar y validar vectores plasmídicos para la expresión autorregu-lada dependiente de hipoxia e inflamación de proteínas terapéuticas útiles en enfermedades crónicas y degenerativas. En la primera etapa se realizó el análisis, el diseño, la construcción y la validación de los promotores sintéticos en condiciones in vitro de hipoxia e inflamación. Se generaron varias versiones y se seleccionó el plásmido con el promotor sintético de mayor respuesta al ambiente hipóxico e inflamatorio (versión pE+C) mediante la expresión de la pro-teína verde fluorescente. La región E+C contiene dos secuencias: EPO125 o secuencia “E” y CAGA48 o secuencia “C” y se diseñó para potenciar la actividad de un promotor genérico como el CMVb o específico para tejido como el TBG de hígado en la expresión de la proteína terapéutica objetivo. Para este proyecto se incluyó el gen de la interleucina 10 de humano (hIL-10) por ser una potente proteína antifibrótica. En la segunda etapa, se evaluó in vivo el efecto terapéutico de las dos versiones del plásmido, pE+C-TBG+hIL-10 y pE+C-CMV+hIL-10, en un modelo de cirrosis hepática inducida por CCl4 en ratones y en un modelo de artritis reumatoide inducida por colágena en ratones, respectivamente. Los resultados demostraron que la terapia empleando el plásmido pE+C-TBG-hIL-10 mostró un efecto antifibrótico me-diante el bloqueo y reversión de la fibrosis hepática in vivo, mostrando un 100% de supervi-vencia. Mientras que la terapia con el plásmido pE+C-CMV+hIL-10 mostró 100% de eficacia en reversión de la inflamación a valores basales en las patas de los ratones tratados, compara-do contra el 30% de ratones tratados con medicamento biotecnológico (Etanercept, Enbrel).En conclusión, los vectores plasmídicos desarrollados expresan proteínas terapéuticas de for-ma autorregulada, dependiente de hipoxia e inflamación y pueden ser utilizados como una terapia más efectiva contra las enfermedades crónico-degenerativas"
15-12-2020
Tesis de doctorado
CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA
Versión publicada
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