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http://ciatej.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1023/845| Desarrollo de un vector pAAV-Pou5F1-IRES-GFP como reportero celular de pluripotencia en líneas celulares hESC | |
| Karen Jaqueline Juárez Navarro | |
| NESTOR EMMANUEL DIAZ MARTINEZ | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución-NoComercial-SinDerivadas | |
| Las células troncales embrionarias humanas (hESC), por su capacidad de diferenciación hacia cualquier linaje de las tres capas germinales y autorrenovación son de gran importancia para la investigación y las terapias de medicina regenerativa; sin embargo, el estado de pluripotencia en las células hESC es un factor determinante y limitante para su posterior aplicación terapéutica. Por lo que, resulta de vital importancia el evaluar esta singularidad en las hESC de manera continua, no obstante, los métodos de selección y evaluación utilizados actualmente presentan desventajas como la alta demanda de tiempo, los altos costos y no son métodos escalables. En el presente trabajo, se desarrolló el reportero celular pAAV-POU5F1-IRES-GFP que contiene la secuencia del promotor de Pou5f1, un gen fundamental en el mantenimiento de pluripotencia. El vector desarrollado se transfectó a las líneas hESC H9 y Amicqui-1 aislando las células positivas a GFP (GFP+) para comparar su tasa de proliferación y expresión de marcadores de pluripotencia Oct3/4, Nanog y Sox2. Se observó una correcta expresión del reportero GFP+ posterior a su inserción en las líneas hESCs H9 y Amicqui-1. Adicionalmente, las células GFP+ seleccionadas en la línea H9 presentaron un incremento significativo (p<0.001) en la tasa de proliferación en comparación con las células control; en contraste no se observaron cambios significativos (p<0.91) en la línea Amicqui-1. Así mismo, la expresión de Oct3/4 fue mayor en las células GFP+ con respecto a los controles en ambas líneas, sin embargo, solo estadísticamente significativa para las células Amicqui-1 GFP+ (p<0.002). No se encontraron diferencias significativas en la expresión de los marcadores Sox2 y Nanog en ninguna de las dos líneas. Los resultados obtenidos sugieren, que la selección de poblaciones positivas al reportero celular pAAV-POU5F1-IRES-GFP, conlleva la obtención de poblaciones celulares con un incremento en la expresión de Oct3/4 y con una mayor tasa de proliferación; sin embargo, aún es necesario obtener mayor evidencia para determinar la funcionalidad del vector sobre distintas líneas celulares y estados de pluripotencia. | |
| 11-08-2022 | |
| Tesis de maestría | |
| MEDICINA Y CIENCIAS DE LA SALUD | |
| Versión publicada | |
| publishedVersion - Versión publicada | |
| Aparece en las colecciones: | MAESTRÍA EN CIENCIAS EN INNOVACIÓN BIOTECNOLÓGICA |
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